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細(xì)胞培養(yǎng)基大盤(pán)點(diǎn):不同種類(lèi),不同用途

發(fā)布時(shí)間:2024-06-13     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  上篇文章為大家介紹《常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)基及選擇》。今天圍繞著細(xì)胞培養(yǎng)基的分類(lèi)為大家詳細(xì)介紹下基礎(chǔ)培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基種類(lèi)。

  基礎(chǔ)培養(yǎng)基


  基礎(chǔ)培養(yǎng)基的主要成份是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)(血清、生長(zhǎng)因子、抗生素和緩沖液)?;A(chǔ)培養(yǎng)基種類(lèi)很多,其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12是應(yīng)用較為廣泛的。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。具體特征如下:


培養(yǎng)基 特征
應(yīng)用

M199培養(yǎng)基

199 號(hào)培養(yǎng)基,通常稱(chēng)為 M199,是 JF Morgan 于 1950 年開(kāi)發(fā)的一種細(xì)胞培養(yǎng)基。有各種必需和非必需 氨基酸、葡萄糖、膽固醇、嘧啶和維生素,包括硫胺素、核黃素和生物素。

廣泛的應(yīng)用范圍還擴(kuò)展到生物制劑生產(chǎn)、藥物篩選和毒理學(xué)研究,促進(jìn)了醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)的進(jìn)步。


BME培養(yǎng)基

BME由HarryEagle在1955年開(kāi)發(fā)的,成分主要是BSS+12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素。

BME是一種用于 HeLa 細(xì)胞、小鼠成纖維細(xì)胞和其他人類(lèi)細(xì)胞系(如 WI-38 和 MRC-5)生長(zhǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基

MEM培養(yǎng)基

由HarryEagle在1959年在基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基改良的產(chǎn)物,它針對(duì)性地提高了BME的氨基酸濃度,使其達(dá)到BME的兩倍,并添加了一些BME中沒(méi)有的必需氨基酸,例如谷氨酰胺。同時(shí),MEM培養(yǎng)基將賴(lài)氨酸和生物素的濃度降低,使其成為一種“低限量”的培養(yǎng)基。

MEM培養(yǎng)基常用于培養(yǎng)成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等貼壁細(xì)胞,也適用于一些懸浮細(xì)胞的培養(yǎng),例如:一些淋巴細(xì)胞、白血病細(xì)胞等。

DMEM培養(yǎng)基

DMEM是由杜爾貝克(Dulbecco)1959年在Eagle基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MEM)上改良而成的。改良后,DMEM氨基酸和維生素的濃度提高了一倍,并補(bǔ)充了一些非必需氨基酸,例如甘氨酸和絲氨酸,以及鐵和丙酮酸,以滿(mǎn)足更多細(xì)胞的生長(zhǎng)需求。

DMEM最初是為了培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞而設(shè)計(jì)的,后來(lái)被廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞系的培養(yǎng),包括腫瘤細(xì)胞。

IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基

scove在1976年對(duì)Dulbecco'sMedium進(jìn)行改良,創(chuàng)造了Iscove'sMedium,最初用于培養(yǎng)骨髓細(xì)胞,特別是紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞前體。補(bǔ)充了DMEM中不存在的幾種非必需氨基酸和維生素(氰鈷胺和生物素)以及額外的亞硒酸鹽、丙酮酸鹽和HEPES。添加了轉(zhuǎn)鐵蛋白、牛血清白蛋白和大豆脂質(zhì)作為血清替代品。

可用于雜交瘤細(xì)胞和高密度細(xì)胞的快速培養(yǎng)。

RPMI-1640培養(yǎng)基

RPMI-1640培養(yǎng)基是在1967年由RPMI研制,主要研發(fā)人員是GeorgeE.Moore和HenryR.Hsiung。最初是為淋巴細(xì)胞設(shè)計(jì),含BSS+21種氨基酸+維生素11種等。

RPMI-1640培養(yǎng)基現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛用于培養(yǎng)其他類(lèi)型的細(xì)胞,例如哺乳動(dòng)物細(xì)胞、特殊造血細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞等。

Ham's F10、F12培養(yǎng)基

HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基是由 RichardG.Ham于1963年設(shè)計(jì),最初是為了培養(yǎng) 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞) 而設(shè)計(jì)的,目的是在低血清濃度下實(shí)現(xiàn)CHO細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。Ham'sF12是第一個(gè)能夠在無(wú)血清條件下支持單個(gè)CHO細(xì)胞克隆生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。它通過(guò)添加三種純化血清蛋白(血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素)代替血清,并詳細(xì)研究氨基酸和微量元素的種類(lèi)和濃度,實(shí)現(xiàn)了這一目標(biāo)。

F10適用于倉(cāng)鼠、人二倍體細(xì)胞,F(xiàn)12適用于CHO細(xì)胞。在低血清含量下時(shí),特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng),添加血清后也廣泛應(yīng)用于癌細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng),如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等。

DMEM/F12培養(yǎng)基

DMEM/F-12培養(yǎng)基是由營(yíng)養(yǎng)豐富的DMEM培養(yǎng)基和成分豐富的Ham'sF12培養(yǎng)基以1:1的比例混合而成。它結(jié)合了兩種培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn),能夠提供更豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,也更適合在低血清或無(wú)血清的條件下培養(yǎng)細(xì)胞,因此可以滿(mǎn)足多種細(xì)胞類(lèi)型的要求,例如原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。

廣泛應(yīng)用于多種哺乳類(lèi)細(xì)胞的培養(yǎng)。同時(shí),常作為開(kāi)發(fā)無(wú)血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ),也適用于低血清含量下哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng)


McCoy's 5A培養(yǎng)基

McCoy's5A培養(yǎng)基是由McCoy在1959年為肉瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)的,是改良自BasalMedium5A的一種培養(yǎng)基。它包含還原型谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖,并進(jìn)行了其他成分的調(diào)整和添加,使其能夠支持多種類(lèi)型的原代細(xì)胞的培養(yǎng),例如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。

McCoy's 5A廣泛用于多種類(lèi)型的原代細(xì)胞的培養(yǎng),如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。此外McCoy's 5A培養(yǎng)基還用于組織活檢培養(yǎng)、細(xì)胞建系,以及一些淋巴細(xì)胞和較難培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)。

L15細(xì)胞培養(yǎng)基

L-15培養(yǎng)基是由Moore等人在1967年設(shè)計(jì)的。最初是為了為培養(yǎng) 快速增殖的腫瘤細(xì)胞 而設(shè)計(jì)的,L-15培養(yǎng)基的主要目的,是在沒(méi)有CO2的環(huán)境下,培養(yǎng)快速增殖的腫瘤細(xì)胞。它采用磷酸鹽緩沖體系,并用半乳糖替代了葡萄糖,以適應(yīng)無(wú)CO2環(huán)境的特點(diǎn)。

L-15培養(yǎng)基適用于猴腎細(xì)胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代(如胚胎和成人組織)細(xì)胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等



  完全培養(yǎng)基


  完全培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加了血清、抗生素等物質(zhì),也稱(chēng)為含血清培養(yǎng)基。其中大部分細(xì)胞培養(yǎng)常用的是牛血清,因?yàn)榕Q逯泻写龠M(jìn)細(xì)胞增殖的各種生長(zhǎng)因子,例如胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)等。此外為防止污染,培養(yǎng)液中通常添加一定量的抗生素,例如青霉素、鏈霉素等。

  完全培養(yǎng)基根據(jù)添加血清量的多少,可分為細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞維持培養(yǎng)基。細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基通常添加高濃度血清,促進(jìn)細(xì)胞快速增殖;細(xì)胞維持培養(yǎng)基通常添加低濃度血清,維持細(xì)胞存活和功能。

  無(wú)血清培養(yǎng)基


  無(wú)血清培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上引入成分明確或部分明確的血清替代成分,例如生長(zhǎng)因子、黏附因子、激素、脂類(lèi)、蛋白質(zhì)等,主要由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物(替代血清的補(bǔ)充因子)組成。其主要成分包括以下幾類(lèi):

  黏附因子:約有80%的哺乳動(dòng)物細(xì)胞是屬于貼附型生長(zhǎng),一般的細(xì)胞培養(yǎng)基是利用血清作為其來(lái)源,在無(wú)血清培養(yǎng)基中,細(xì)胞黏附因子是十分重要的物質(zhì),例如纖連蛋白、層粘連蛋白等。

  生長(zhǎng)因子:生長(zhǎng)因子是維持細(xì)胞活性與促進(jìn)細(xì)胞增生、遷移、分化等,不可或缺的要素,例如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)等。

  酶抑制劑:貼附型細(xì)胞一般多以胰蛋白酶(trypsin)進(jìn)行傳代,在一般細(xì)胞培養(yǎng)中,血清中含有抑制胰蛋白酶的成分,例如α-1抗胰蛋白酶,所以無(wú)血清培養(yǎng)基必須添加胰蛋白酶抑制劑,例如大豆胰蛋白酶抑制劑或抑肽酶。

  細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,并進(jìn)行逐步適應(yīng),以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。

  優(yōu)點(diǎn)

  成分明確,避免了血清成分帶來(lái)的未知影響。

  避免了血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染。

  雜蛋白含量少,避免血清成分影響研究結(jié)果或產(chǎn)品制程,提高產(chǎn)品表達(dá)水平并易于純化。

  缺點(diǎn)

  無(wú)血清培養(yǎng)基成本較高。

  并非所有的細(xì)胞都能在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

  細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和化學(xué)因素的影響,培養(yǎng)基保存和應(yīng)用方面局限性很大。

  這篇文章為大家介紹了常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi),相信你對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基有所了解。培養(yǎng)基的選擇要結(jié)合細(xì)胞的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)的需要選擇,如有不明白可以向廠(chǎng)家咨詢(xún)或者查閱文獻(xiàn)。上海通蔚有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基和細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基,如需了解,歡迎前來(lái)咨詢(xún)我們?cè)诰€(xiàn)顧問(wèn),價(jià)格實(shí)惠,質(zhì)量保障!