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大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 脊髓
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù)；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H 形（蝴蝶型）灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)（稱為脊神經(jīng)）分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的最微細(xì)的血管。
介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7～9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。最細(xì)的毛細(xì)血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的毛細(xì)血管由2～3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)毛細(xì)血管；分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管，除有縫隙連接外，細(xì)胞本身有許多小孔，（孔徑800～1000埃），稱有孔毛細(xì)血管；分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管，管腔擴(kuò)大，稱血竇。
毛細(xì)血管的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)（8～10微米）、數(shù)量多、血流速度慢，這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場所，又稱交換血管。血竇（sinusoid）由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成，竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同，由單層內(nèi)皮 細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙；肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的，有較寬的細(xì)胞隙（0.1～0.5微米）；肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜，通透性比毛細(xì)血管大，較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞，脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞，這兩種細(xì)胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的異物、細(xì)菌等有害物質(zhì)，是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： PLL（0.1m g/ml），明膠（0.1%）
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、EG F、bFG F、IG F、V EG F、H eparin、H ydrocortisone、P enicil
lin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 ： 可傳2-3代
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
