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產(chǎn)品及特點：
牛赤羽病毒(Akabane Virus，AKAV) 會引起赤羽病，又稱阿卡班病，是牛、羊的一種以流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎兒畸形、木乃伊、新生胎兒發(fā)生關(guān)節(jié)彎曲積水性無腦綜合癥為特征的病毒性傳染病。特征性的表現(xiàn)是妊娠牛異常分娩，多發(fā)生于懷孕 7 個月以上或接近妊娠期滿的牛。感染初期胎齡越大的胎兒早產(chǎn)發(fā)生的越多，中期發(fā)生難產(chǎn)，即使順產(chǎn)，新生犢也不能站立。后期多產(chǎn)出無生活能力的犢?；蛳寡鄣臓倥?。該病毒會給養(yǎng)殖業(yè)帶來較大的經(jīng)濟損失，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測牛赤羽病病毒。
1. 一站式，用戶不需要單獨準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據(jù)牛赤羽病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋） |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
牛赤羽病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL牛赤羽病毒PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
|
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
|
牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
|
N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
|
牛赤羽病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
逆轉(zhuǎn)錄 |
42℃ |
30 min |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有預(yù)期片段大小的擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
