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021-54845833/15800441009
產(chǎn)品及特點：
人類免疫缺陷病毒１型（HIV-１）患者血漿中病毒 RNA 水平一直以來是評判抗病毒治療效果或預(yù)測疾病進展的重要指標(biāo)。但是，經(jīng)抗病毒治療后血漿 HIV-１RNA 已達(dá)到基線水平感染者的血液、精液或淋巴結(jié)中仍可以檢測到 HIV-１原病毒 DNA 的存在，構(gòu)成病毒儲藏庫，對清除 HIV-１病毒構(gòu)成嚴(yán)重阻礙。所以在病毒載量已經(jīng)檢測不到的情況下，HIV-１原病毒 DNA 水平可以作為除 CD4+Ｔ細(xì)胞計數(shù)和病毒載量之外的另一標(biāo)志物。
本產(chǎn)品就是針對此需求而建立的一種檢測 HIV-１原病毒 DNA 的 PCR 檢測方法，該種方法還可用于 HIV-１病毒儲藏庫中 HIV-１原病毒 DNA 的檢測。
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增HIV-1前病毒，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1mL（亮黃色） |
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試劑三 |
HIV-1前病毒PCR引物混合液 |
100μL（白蓋） |
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試劑四 |
HIV-1前病毒PCR陽性對照（1×10E8 /μL） |
50μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 DNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL HIV-1前病毒 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
|
成份 |
N+2個樣品管 |
PCR陰性對照 |
PCR陽性對照 |
|
PCR Magic Mix 3.0 |
各20μL |
20μL |
20μL |
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HIV-1前病毒PCR引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
|
N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
|
PCR陰性對照（水） |
-- |
18μL |
-- |
|
PCR陽性對照（HIV-1前病毒PCR陽性對照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
