編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
2×Probe qPCR MagicMix |
500μL(本色蓋) |
試劑二 |
熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL(黃蓋) |
試劑三 |
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒qPCR引物混合液 |
100μL(白蓋) |
試劑四 |
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒qPCR探針 |
50μL(棕色管) |
試劑五 |
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒探針?lè)?/span>qPCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8/μL) |
50μL(紅蓋) |
使用手冊(cè) |
1 份 |
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):
成份
N+2 個(gè)樣品管
PCR 陰性對(duì)照管
標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管(2-7管)
2×Probe qPCR MagicMix
10μL
10μL
各10μL
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒qPCR探針
1μL
1μL
各1μL
豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒探針?lè)?/span>
qPCR引物混合液
2μL
2μL
各2μL
N+2個(gè)待測(cè)DNA模板
7μL
--
--
超純水
--
7μL
--
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(2-7號(hào))
--
--
各7μL(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管…)
11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:
過(guò)程 |
溫度 |
時(shí)間 |
預(yù)變性 |
95℃ |
3 min |
PCR 反應(yīng)40個(gè)循環(huán) |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
1 min(采集FAM通道的熒光信號(hào)) |