基本信息
細(xì)胞名稱 :小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞 ; 266-6
細(xì)胞品牌 :通蔚生物
細(xì)胞規(guī)格 :1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞英文 :266-6 ; 266/6
基本形態(tài) :上皮樣
傳代方法 :1 : 2傳代
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95%;CO2,5% ;溫度:37℃
生長特性 :貼壁生長
消化時間 :2-3分鐘
凍存條件 :無血清細(xì)胞凍存液
完全培養(yǎng)基 :DMEM(高糖)+10%FBS 266-6完全培養(yǎng)基
培養(yǎng)環(huán)境 :37℃,5%CO2,95%AIR
供應(yīng)范圍 :僅供科研使用
注意事項 :若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有染,請立即與我們聯(lián)系
注意事項 :若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有染,請立即與我們聯(lián)系
到貨處理
1、收到細(xì)胞后,檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題,請即時聯(lián)系。
2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或-80 度冰箱保存,建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系,會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。
特別說明:未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細(xì)胞復(fù)蘇
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。
3、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 T25 培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。
3、棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個 T25),補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時,棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。
3、棄上清,沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的無血清凍存液,混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液)
4、將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。
T25細(xì)胞到貨處理
觀察 收到細(xì)胞后,請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(40x,100x,200x 各一張)前三天照片為重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
4、收到細(xì)胞后,及時查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài),并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。
貼壁
未超過 80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留 5ml 完全培養(yǎng)基,放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。首次傳代,建議 1:2 傳代兩個 T25,傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,進(jìn)行對比培養(yǎng)。
細(xì)胞注意事項
個別細(xì)胞貼壁不牢,在運輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落,這是正常現(xiàn)象。
請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm 離心 5min,收集上清(后期對比培養(yǎng)使用),沉淀加入胰酶 1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化 1-2 分鐘后,加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個 T25),補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意:如收到密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松
細(xì)胞予重發(fā)
1.細(xì)胞運輸中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)。
2.收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。
3.收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā)。
4.常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時后,干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā)。
5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實后,重發(fā)。
6.細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā)。
細(xì)胞不予重發(fā)
1.客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)。
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。
4.細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。
5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā)。