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人臍帶血造血干細(xì)胞
產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 人臍帶血造血干細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 臍帶血
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
人臍帶血造血干細(xì)胞分離自臍帶血；臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn)，臍帶血中含有可以重建造血和免疫系統(tǒng)的造血干細(xì)胞，可用于造血干細(xì)胞移植，因此，臍帶血已成為造血干細(xì)胞的重要來源。臍帶血中含有大量的干細(xì)胞，干細(xì)胞是生命的種子，它會分化成機(jī)體的各種細(xì)胞，結(jié)出各種不同的果實(shí)——血液細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、骨骼細(xì)胞等。干細(xì)胞是具有自我更新、高度增殖和多項(xiàng)分化潛能的細(xì)胞群體；這些細(xì)胞可以通過分裂維持自身細(xì)胞的特性和數(shù)量，又可進(jìn)一步分化為各種組織細(xì)胞，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。
造血干細(xì)胞具有自我更新能力并能分化為各種血細(xì)胞的前提細(xì)胞，最終生成各種血細(xì)胞成分，包括紅細(xì)胞，白細(xì)胞和血小板。造血干細(xì)胞需要根據(jù)機(jī)體的生理需求適時(shí)的補(bǔ)充血液系統(tǒng)各個(gè)成熟細(xì)胞組分。同時(shí)在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下，造血干細(xì)胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個(gè)細(xì)胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中，造血干細(xì)胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病，在其它實(shí)體瘤的治療中，比如淋巴瘤，生殖細(xì)胞瘤，乳腺癌，小細(xì)胞肺癌，主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。
造血干細(xì)胞以不對稱有絲分裂方式進(jìn)行增殖，一個(gè)干細(xì)胞分裂產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞，一個(gè)分化為造血祖細(xì)胞，另一個(gè)則保持干細(xì)胞特征。造血干細(xì)胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細(xì)胞同時(shí)，保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適，造血干細(xì)胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)（滋養(yǎng)層細(xì)胞），缺少滋養(yǎng)層細(xì)胞不增殖，無法長期培養(yǎng)，本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細(xì)胞灌裝發(fā)貨，不包含滋養(yǎng)層，因此收貨后建議盡快實(shí)驗(yàn)。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人臍帶血造血干細(xì)胞采用采集臍帶血、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人臍帶血造血干細(xì)胞經(jīng)C D 34免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、SC F、IL-3、TPO 、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 懸浮
細(xì)胞形態(tài) ： 圓形
傳代特性 ： 不建議傳代
消 化 液 ： 0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人臍帶血造血干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人臍帶血造血干細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不建議傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.懸浮細(xì)胞處理
1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液。
2）1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。
3）加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 復(fù)蘇操作說明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋，預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進(jìn)水導(dǎo)致污染），迅速放于水浴鍋內(nèi)，于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液，加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi)，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法）。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項(xiàng)
5. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時(shí)，請注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5m in，增加細(xì)胞獲取量。為維持細(xì)胞干性，發(fā)貨細(xì)胞瓶內(nèi)只灌裝1/3-1/2液體，請注意并非漏液。
