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021-54845833/15800441009
產品簡介
產品名稱 ： 人外周血巨噬細胞
產品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 外周血
產品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人外周血巨噬細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念。
巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞較易獲得，便于培養(yǎng)，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存。巨噬細胞（M acrophages）是一種位于組織內的白血球，源自單核細胞，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。
巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛(wèi)（先天性免疫）和特異性防衛(wèi)（細胞免疫）。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人外周血巨噬細胞采用取外周血、通過密度梯度離心法、差速貼壁、細胞因子誘導法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的人外周血巨噬細胞經C D 68免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、M -C SF、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 巨噬細胞樣
傳代特性 ： 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 利多卡因（12m M ）
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人外周血巨噬細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人外周血巨噬細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈巨噬細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.特殊細胞消化一
1）吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2）添加利多卡因（12m M ）消化液1m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，37℃溫浴3min（不能超過5min）；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基稀釋消化液。
3）用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，吸出細胞懸液，經1200rpm 離心5min，丟棄上清；
4）用完全培養(yǎng)基重懸細胞，計數(shù)接種于相應實驗器具內，待細胞完全貼壁后開始試驗（預計2h貼壁，12-24h完全展開）。
5）待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3.特殊細胞消化二
1）若細胞無法消化，更換消化液為0.25% 胰蛋白酶，按照上述消化一方案操作。
2）若仍然無法消化，加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，采用無菌細胞刮，直接刮取細胞（此法不推薦，最后選擇，會造成細胞機械損傷死亡）。
4.復蘇操作說明
1. 準備好37度水浴鍋，預熱至37度。
2. 準備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內凍存細胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內進水導致污染），迅速放于水浴鍋內，于1min內融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內。
5. 吸取凍存管內細胞懸液，加入步驟2中準備好的T25培養(yǎng)瓶內，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細胞、懸浮細胞不同換液操作方法）。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
