編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
2×Probe qPCR MagicMix |
500μL(本色蓋) |
試劑二 |
熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液 |
1mL(黃蓋) |
試劑三 |
假單胞菌屬通用qPCR引物混合液 |
100μL(白蓋) |
試劑四 |
假單胞菌屬通用qPCR探針 |
50μL(棕色管) |
試劑五 |
假單胞菌屬通用探針?lè)?/span>qPCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8/μL) |
50μL(紅蓋) |
使用手冊(cè) |
1 份 |
成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對(duì)照管 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管2-7管 |
2×Probe qPCR MagicMix |
10μL |
10μL |
各10μL |
假單胞菌屬通用qPCR探針 |
1μL |
1μL |
各1μL |
假單胞菌屬通用探針?lè)?/span>qPCR引物混合液 |
2μL |
2μL |
各2μL |
N+2個(gè)待測(cè)DNA模板 |
7μL |
-- |
-- |
超純水 |
-- |
7μL |
-- |
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液2-7號(hào) |
-- |
-- |
各7μL2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管 |
過(guò)程 |
溫度 |
時(shí)間 |
預(yù)變性 |
95℃ |
3 min |
PCR反應(yīng)40個(gè)循環(huán) |
95℃ |
15 sec |
60℃ |
1 min(采集FAM通道的熒光信號(hào)) |
四、數(shù)據(jù)處理:
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct值小于 40,擴(kuò)增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽(yáng)性,否則為陰性。
五、特別提示: