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      品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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      產(chǎn)品中心

      • 類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

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        • 品牌 : 通蔚生物
        • 目錄號(hào) : TW40462
        • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
        • 保存條件 : 低溫/避光保存
        • 貨期 : 現(xiàn)貨
        • 商品庫(kù)存:100
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      產(chǎn)品及特點(diǎn):
      類(lèi)鼻疽(melioidosis)是由類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌所致的地方性傳染病,人主要是通過(guò)接觸含有致病菌的水和土壤,經(jīng)破損的皮膚而受感染。本菌含有兩種主要抗原,一為特異性耐熱多糖抗原,另一為與鼻疽桿菌相同的不耐熱蛋白質(zhì)共同抗原。本病臨床表現(xiàn)復(fù)雜,有急性敗血癥者常伴多處化膿性損害,慢性者類(lèi)似空洞型肺結(jié)核表現(xiàn)。病情一般較為嚴(yán)重,如不及時(shí)治療,病死率甚高。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛縋CR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌的試劑盒。
      1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
      2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
      3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
      4. 特異性高,引物是根據(jù)類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒 DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
      5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。
      規(guī)格及成分:

      編號(hào)

      成分

      規(guī)格

      試劑一

      2×Probe qPCR MagicMix

      500μL(本色蓋)

      試劑

      熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液

      1mL(黃蓋)

      試劑二

      類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌qPCR引物混合液

      100μL(白蓋)

      試劑四

      類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌qPCR探針

      50μL(棕色管)

      試劑五

      類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌探針?lè)?/span>qPCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8/μL)

      50μL(紅蓋)

       

      使用手冊(cè)

      1份

      運(yùn)輸及保存:
      低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
      自備試劑:
      樣品DNA。
      使用方法:
      一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例):
      由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
      1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
      2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
      3. 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
      4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
      5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。
      6. 放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
      二、樣品DNA的制備: 
      7. 如果有 N 個(gè)樣品,最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。
      8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。
      三、Probe qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行):
      9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
      10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):

      成份

      N+2個(gè)樣品管

      PCR陰性對(duì)照管

      標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管2-7管

      2×Probe qPCR MagicMix

      10μL

      10μL

      10μL

      類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌qPCR探針

      1μL

      1μL

      1μL

      類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌探針?lè)?/span>qPCR引物混合液

      2μL

      2μL

      2μL

      N+2個(gè)待測(cè)DNA模板

      7μL

      --

      --

      超純水

      --

      7μL

      --

      7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液2-7號(hào)

      --

      --

      7μL2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管

      11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:

      過(guò)程

      溫度

      時(shí)間

      預(yù)變性

      95℃

      3 min

      PCR反應(yīng)40個(gè)循環(huán)

      95℃

      15 sec

      60

      1 min(采集FAM通道的熒光信號(hào))

      四、數(shù)據(jù)處理:
      12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA濃度的 log 值,再推算出其濃度。
      13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct值小于 40,擴(kuò)增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽(yáng)性,否則為陰性。 
      五、特別提示:
      本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!