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  • 小鼠接觸蛋白1(CNTN1)ELISA試劑盒

    規(guī)格：
    價格：￥
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E4012
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 英文名 ：Mouse CNTN1 ELISA KIT
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 靈敏度 ：0.08ng/mL
    • 規(guī)格 ：48T/96T
    • 檢測范圍 ：0.157 ~ 10ng/mL
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小鼠接觸蛋白1(CNTN1)ELISA試劑盒
簡介
接觸素1，也被稱為CNTN1，是一種蛋白質(zhì)，由CNTN1基因編碼，該基因所編碼的蛋白是免疫球蛋白超家族的成員，它是一種糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定的神經(jīng)元膜蛋白，作為一種細(xì)胞粘附分子發(fā)揮作用，它可能在發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)中的軸突連接的形成中起作用，該基因有兩個交替剪接的轉(zhuǎn)錄本變體，編碼不同的異構(gòu)體，與CNTN1相關(guān)的疾病包括肌病，先天性，康普頓-北方和脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)病，其相關(guān)途徑包括 GPCR 信號傳導(dǎo)和Notch信號傳導(dǎo)途徑（WikiPathways），與該基因相關(guān)的基因本體論注釋包括碳水化合物結(jié)合和蛋白質(zhì)結(jié)合，該基因的一個重要同系物是CNTN2。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物CNTN1，清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中CNTN1的濃度。
需要的其他材料
1.  酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2.  移液器及槍頭；
3.  蒸餾水或去離子水；
4.  100-1000 mL刻度量筒；
5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6.  水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。
試劑準(zhǔn)備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個試管，先從200ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至10ng/mL（例：50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的10ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將10ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為: 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.157ng/mL，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ng/mL)。

小鼠(CNTN1)ELISA試劑盒

抗體工作液配置
使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據(jù)所需用量配置。
備注：如待測樣本中CNTN1濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
結(jié)果的計算
計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0.157

0

OD值

2.496

1.629

1.02

0.788

0.419

0.298

0.125

0.05

校正OD值

2.446

1.579

0.97

0.738

0.369

0.248

0.075

0


下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例，結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計算樣本結(jié)果

小鼠(CNTN1)ELISA試劑盒

重復(fù)性
板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于10%。
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為0.08ng/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組小鼠CNTN1。
其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
使用ELISA試劑盒之前，請您必須完整閱讀說明書，本產(chǎn)品僅供科研使用，不能于臨床診斷或治療。