測(cè)定方法:分光光度法
測(cè)定規(guī)格:50管/24樣
保存條件:低溫避光保存
有 效 期:6個(gè)月
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的 NADH 經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧, 在合成 ATP 的同時(shí),形成大量的 ROS,同時(shí)NADH 再生為 NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和 TCA 循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理:
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原
氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在 570nm 下檢測(cè)吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用 MTT 還原法檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。