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ELISA技術(shù)支持

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elisa的類型有哪些?

發(fā)布時間:2022-01-15     發(fā)布作者:上海通蔚生物

夾心法

夾心法常用于檢測大分子抗原,一般之操作步驟為:

將具有專一性之抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

加入待測檢體,檢體中若含有待測之抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一之一次抗體,與待測抗原進行鍵結(jié)

洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酵素之二次抗體,與一次抗體鍵結(jié)

洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

間接法

間接法常用于檢測抗體,一般之操作步驟為:

將已知之抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余之抗原。

加入待測檢體,檢體中若含有待測之一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結(jié)。

洗去多余待測檢體,加入帶有酵素之二次抗體,與待測之一次抗體鍵結(jié)。

洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。

競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:

將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。

洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。

當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。