ELISA檢測方法詳解：競爭法和阻斷法的區(qū)別

  ELISA全稱為酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay),是一種在免疫學實驗方法中常用的檢測技術(shù),廣泛應用于醫(yī)學、生物學、食品安全、環(huán)境監(jiān)測和藥物篩選等領(lǐng)域。在ELISA實驗類型中又分為直接ELISA、間接ELISA和競爭ELISA等。除此之外，還有個阻斷ELISA法，很多人會把阻斷ELISA法區(qū)別競爭ELISA法，今天，上海通蔚帶大家來認識下阻斷ELISA法和競爭ELISA法區(qū)別。

  ELISA基本原理

ELISA檢測是在96酶標板上進行，將待檢測樣品（抗原或抗體）固定在板上，然后通過特異性抗體與待測樣品結(jié)合，從而形成酶標復合物。最終通過底物與酶作用，產(chǎn)生可測定的信號。

  競爭ELISA法

  競爭ELISA法關(guān)鍵在于待測樣本中的抗原和實驗中添加的已知抗原會爭奪固相載體上固定抗體的結(jié)合位點。競爭ELISA法步驟如下：

  1.將一抗（未標記）與樣品抗原一起孵育。

  2.然后將抗體-抗原復合物添加到預先涂有相同抗原的96孔板中。

  3.通過清洗板去除未結(jié)合的抗體。（樣品中的抗原越多，能夠與孔中的抗原結(jié)合的抗體就越少，因此存在“競爭”。）

  4.添加對一抗具有特異性并與酶結(jié)合的二抗。

  5.添加底物，剩余的酶引發(fā)顯色或熒光信號。

  6.對于競爭性ELISA，樣品抗原濃度越高，最終信號越弱。

  阻斷ELISA法

  阻斷ELISA法的關(guān)鍵在于通過樣品中的抗體阻斷已知量的標記抗體與固定抗原的結(jié)合。阻斷ELISA法步驟如下：

  將已知的抗原被吸附在固相載體（如ELISA微孔板）上，形成一個固定的抗原層。

  加入樣品，如果樣品中含有與固相載體上抗原特異性結(jié)合的抗體，這些抗體將與固相載體上的抗原結(jié)合。

  隨后加入標記了酶的二抗（通常是與抗原結(jié)合的抗體）。如果樣品中已有抗體占據(jù)了抗原的結(jié)合位點，標記抗體將無法有效結(jié)合到固相載體上。

  顯色與信號檢測：通過顯色反應測定酶的活性，信號輸出的強度與固相載體上結(jié)合的標記抗體的量成正比。因此，樣品中特異性抗體的量越高，標記抗體的結(jié)合就越少，信號輸出也越低。信號輸出的強度與樣品中特異性抗體的量成反比。

  主要區(qū)別

  用途

  阻斷ELISA法特別適用于檢測樣品中抗體的存在和濃度，尤其在樣品中可能存在干擾性物質(zhì)或多種抗體的情況下。

  競爭法ELISA通常用于檢測小分子物質(zhì)等，因為這些小分子物質(zhì)通常只有一個或有限的抗原位點。此外，也可用于檢測抗體。

原理：競爭法ELISA中，樣品中的抗原或抗體與固定在固相載體上的抗原或抗體競爭結(jié)合標記了酶的抗體；而阻斷法ELISA中，樣品中的抗體會與固相載體上的抗原結(jié)合，從而阻斷標記了酶的抗體的結(jié)合。

上述是通蔚生物為大家介紹競爭和阻斷ELISA法之間的區(qū)別，具體選擇哪種方法要根據(jù)實驗要檢測樣本的需要。如果您對ELISA類型還有疑問，歡迎前來咨詢通蔚ELISA顧問。通蔚有擁有15年以上的酶聯(lián)免疫試劑盒生產(chǎn)經(jīng)驗，搭建了ELISA試劑盒開發(fā)和成熟抗原-抗體系統(tǒng)的良好平臺。