通蔚生物
土壤脂肪酶(Solid-Lipase,S-LPS)活性試劑盒測定原理
注 意 :正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
LPS 又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS 廣泛的存在于
各種生物中。
測定原理:
LPS 催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計算 LPS 活性。
自備儀器和用品:
研缽、臺式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、甲
苯 80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 10 μL×1 瓶,10 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液,4℃保存。臨用前加入 3.168 mL 甲苯,充分溶解。
樣本處理:
建議稱取約 0.1g 土樣,加入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,再用回旋式振蕩器振蕩提取 15min,4℃,4000g 離
心 10min,取上清待測。
S-LPS 測定操作:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 710 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于 37℃水浴預(yù)熱 30min。
3. 在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑
37℃振蕩反應(yīng) 5 min 后,靜置 5min,取 200μL 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板,于 710nm 處測定吸光值。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
S-LPS 活性計算公式:
活性單位定義:37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。
S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管)]×V 反總÷(W×V 樣
÷V 樣總)÷T=16×[(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管)]÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL;V 反總:反應(yīng)總體積,0.8mL;V 樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.05mL;V 樣總:
加入提取液體積,1mL; W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,10 min。
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