發(fā)布時間:2024-04-07 發(fā)布作者:上海通蔚生物
通蔚生物直鏈淀粉含量試劑盒測定原理介紹如下:
注 意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。測定原理:利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在 620nm 下有吸收峰。
需自備的儀器和用品:酶標(biāo)儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。
試劑的組成和配制:試劑一:液體 100mL×1 瓶;4℃保存;試劑二:乙醚 100mL×1 瓶;(自備)試劑三:液體 100mL×1 瓶;4℃保存;試劑四:液體 2mL×1 瓶;4℃保存;試劑五:液體 300uL×1 瓶;4℃保存;淀粉提?。悍Q取 0.01~0.02g 烘干樣本(建議稱取約 0.01g)于研缽中研碎,加入 1mL 試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑二(乙醚)振蕩5min,3000g,25℃離心 5min,棄上清,留沉淀,加入 1mL 試劑三充分溶解,90℃水浴 10min,冷卻后待測。
測定步驟:1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 620nm,蒸餾水調(diào)零。
測定管:在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 樣本, 14μL 試劑四,120μL 蒸餾水,2μL 試劑五,44uL 蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 測定??瞻坠埽涸?96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20μL 試劑三, 14μL 試劑四,120μL 蒸餾水,2μL 試劑五,44μL 蒸餾水,混勻,測定 620nm 處吸光值,記為 A 空白。
直鏈淀粉含量計算:a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y=1.755x+0.0062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A 測定-A 空白-0.0062)÷Cpr2、按樣本干重計算直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷WV1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gb. 用 96 孔板測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y= 0.8775x+0.0062;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),
y 為吸光值。1、按照蛋白濃度計算直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測定-A 空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷Cpr2、按樣本干重計算直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測定-A 空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A 測定-A 空白-0.0062) ÷WV1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g最低檢測限為 1mg/g 干重或 10μg/mgprot。
上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的直鏈淀粉含量試劑盒科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。