ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟詳解：從樣本制備到結(jié)果解讀

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA) 是免疫學(xué)和臨床實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用的診斷測(cè)試，用于檢測(cè)樣品中是否存在特定抗體、抗原或蛋白質(zhì)。ELISA 測(cè)試有多種變體，包括直接、間接和夾心 ELISA。以下是間接 ELISA 程序的總體概述，該方法通常用于檢測(cè)樣品中是否存在抗體。詳情elisa類型

  一、材料和試劑

  1. 微量滴定板（通常為96孔板）

  2. 抗原（您想要檢測(cè)抗體的物質(zhì)）

  3. 一抗（您要測(cè)試的抗體）

  4. 酶（通常是辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶）綴合的二抗

  5. 底物溶液（酶存在時(shí)變色）

  二、ELISA步驟

  1. 涂板

  - 將抗原添加到微量滴定板的孔中并孵育以使抗原結(jié)合到塑料表面。然后洗掉任何未結(jié)合的抗原。

  2. 阻止

  - 在孔中添加封閉溶液以防止抗體的非特異性結(jié)合。

  3. 添加檢測(cè)抗體

  - 將測(cè)試樣品（含有一抗）添加到孔中并孵育。如果樣品中存在一抗，它們將與包被的抗原結(jié)合。

  4. 洗滌

  - 清洗板以除去任何未結(jié)合的抗體。

  5. 二抗

  - 添加對(duì)一抗物種具有特異性的二抗（例如，針對(duì)人一抗添加抗人二抗）。二抗與酶綴合。

  6. 孵化

  - 孵育板，使二抗與任何與包被抗原結(jié)合的一抗結(jié)合。

  7. 洗滌

  - 清洗板以除去任何未結(jié)合的二抗。

  8. 添加底物：

  - 添加酶可以作用的底物溶液。該酶催化與底物的反應(yīng)，導(dǎo)致顏色變化。顏色變化的強(qiáng)度與結(jié)合的二抗的量成正比，進(jìn)而與樣品中一抗的量成正比。

  9. 閱讀結(jié)果

  - 測(cè)量板中每個(gè)孔的吸光度或光密度。酶標(biāo)儀用于量化顏色變化，這與樣品中一抗的濃度直接相關(guān)。

  10. 數(shù)據(jù)分析

  - 將測(cè)試樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線或?qū)φ諛悠愤M(jìn)行比較，以確定測(cè)試樣品中一抗的濃度。

  值得注意的是，ELISA 程序可能會(huì)根據(jù)所測(cè)試的特定抗原抗體系統(tǒng)和所使用的 ELISA 類型（例如直接、間接、夾心）而有所不同。ELISA 測(cè)試還可以適應(yīng)各種應(yīng)用，包括檢測(cè)抗原或蛋白質(zhì)，而不僅僅是抗體。此外，所使用的試劑和條件可能有所不同，因此必須遵循所使用的特定 ELISA 試劑盒或?qū)嶒?yàn)室方案提供的說明。