PCR 家族新成員：RT-PCR 為何如此重要？

  PCR技術只能擴增DNA，而不能直接擴增RNA，因此，逆轉錄技術PCR(RT-PCR)誕生，逆轉錄酶可以將 RNA 逆轉錄成 cDNA (互補 DNA)，cDNA 與原來的 RNA 序列互補，但它具有 DNA 的穩(wěn)定性和易于擴增的特性。RT-PCR 是一項強大的工具，它將 PCR 技術的應用范圍擴展到了 RNA 分子，為生命科學研究和醫(yī)學診斷做出了重要貢獻。接下來，上海通蔚為大家詳細介紹下什么是什么是RT-PCR？和PCR有啥區(qū)別？一起來了解下它們概念，來更好的做PCR實驗。

  什么是PCR

   PCR（聚合酶鏈式反應）是一種實驗室技術，由KaryMullis在20世紀80年代開發(fā)，如今用于從少量DNA產生大量DNA。

    PCR通常是其他過程中使用的步驟，例如DNA測序、病原體檢測和凝膠電泳。PCR是一種重要的診斷技術，常用于病毒學、微生物學、寄生蟲學、真菌學和牙科等領域。

    聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于制備DNA特定片段的多個副本的方法。這個過程從少量模板DNA開始，然后通過稱為聚合酶的酶進行復制。通過重復加熱和冷卻循環(huán)可以增加復制的數量，這會分離DNA鏈，以便它們可以再次復制。

    PCR的最終產物是目標DNA序列的大量相同副本。然后該產品可用于進一步分析，例如測序或Southern印跡。PCR還可用于從mRNA模板分子制備cDNA。

圖1 PCR擴增示意圖

  什么是RT-PCR

  逆轉錄PCR（RT-PCR）允許使用RNA作為模板。另一個步驟可以檢測和擴增RNA。使用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為互補DNA(cDNA)。RNA模板的質量和純度對于RT-PCR的成功至關重要。RT-PCR的第一步是合成DNA/RNA雜交體。逆轉錄酶還具有RNaseH功能，可降解雜交體的RNA部分。然后單鏈DNA分子通過逆轉錄酶的DNA依賴性DNA聚合酶活性完成成cDNA。第一鏈反應的效率會影響擴增過程。從這里開始，使用標準PCR程序來擴增cDNA。通過RT-PCR將RNA轉化為cDNA的可能性有很多優(yōu)點，它主要用于基因表達分析。RNA是單鏈且非常不穩(wěn)定，這使得其使用具有挑戰(zhàn)性。它通常作為qPCR的第一步，定量生物樣品中的RNA轉錄本。

  RT-PCR和PCR應用

  PCR通常用于DNA檢測和分析，例如檢測基因突變、DNA序列分析等。

  RT-PCR通常用于檢測RNA的表達水平，例如檢測基因的轉錄水平、miRNA的表達等。

  RT-PC和PCR區(qū)別

  ①相同點：

  都是基于PCR技術的擴增技術；

  都需要引物和酶等試劑；

  都可以用于檢測DNA或RNA序列。

  ②不同點：

  PCR適用于擴增DNA序列；

  RT-PCR適用于擴增RNA序列；

  上述為您介紹了什么是RT-PCR？PCR和PCR-RT區(qū)別。了解區(qū)別，對于PCR實驗應該有個清晰的認識。實驗選擇PCR和RT-PCR具體要結合實驗目標及檢測對象，RT-PCR 技術的出現確實打破了傳統(tǒng) PCR 的局限性，使得我們可以研究和分析 RNA，為分子生物學和醫(yī)學研究打開了新的窗口。也祝您在生物實驗更上一層樓。