細(xì)胞培養(yǎng)：胎牛血清

  胎牛血清(FBS)是研究和工業(yè)實(shí)驗(yàn)室體外細(xì)胞培養(yǎng)工作流程中不可或缺的細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)充劑。含有血清的培養(yǎng)基為重現(xiàn)生理?xiàng)l件的組織來(lái)源細(xì)胞的生長(zhǎng)創(chuàng)造了一個(gè)人工環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)基提供細(xì)胞生長(zhǎng)和功能所必需的能量和營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。血清為細(xì)胞提供細(xì)胞增殖、細(xì)胞維持、細(xì)胞粘附到細(xì)胞培養(yǎng)物支持和信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程支持所需的生長(zhǎng)因子、氨基酸、糖和激素。添加血清有助于維持培養(yǎng)基的pH值并防止在操作細(xì)胞時(shí)遭受機(jī)械損傷。相關(guān)文章《什么是胎牛血清？從基本概念到實(shí)際應(yīng)用的全面解析！》

  如何獲取FBS？

  FBS是從適合食用的懷孕母牛的胎兒血液中采集的。血液在無(wú)菌條件下采集，冷藏并凝固。離心后，血清與凝結(jié)的血細(xì)胞分離。血液采集僅在有執(zhí)照的設(shè)施中進(jìn)行，并且包括健康狀況得到批準(zhǔn)的動(dòng)物。相應(yīng)的主管部門會(huì)檢查FBS設(shè)施以控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生局(OIE)與各國(guó)政府合作，致力于控制傳染性動(dòng)物疾病的傳播。

  一些公司在其產(chǎn)品的可追溯性（動(dòng)物來(lái)源信息和動(dòng)物健康記錄）方面仍存在問(wèn)題。確?？勺匪菪苑浅Ｖ匾?，可以避免血清批次之間的不一致以及產(chǎn)品特性的變化。行業(yè)機(jī)構(gòu)國(guó)際血清工業(yè)協(xié)會(huì)(ISIA)成立的目的是促進(jìn)與動(dòng)物源產(chǎn)品相關(guān)的實(shí)踐的可追溯性和合規(guī)性。加入ISIA的公司的設(shè)施都經(jīng)過(guò)獨(dú)立審計(jì)，并遵守國(guó)際可追溯性標(biāo)準(zhǔn)，包括收集和審查與加工、運(yùn)輸或商業(yè)活動(dòng)有關(guān)的文件。

  不同類型的FBS

  血清可從不同年齡的動(dòng)物身上提取。FBS取自胎兒，而新生牛血清(NBCS)則取自出生不到20天的新生牛犢。成年牛血清取自12個(gè)月以上的牛。血清類型會(huì)影響生化成分。血清的選擇取決于細(xì)胞應(yīng)用和細(xì)胞類型。

  FBS和新生牛血清之間最顯著的區(qū)別之一是循環(huán)抗體的水平。NBCS的免疫球蛋白(IgG)水平高于FBS，因?yàn)槟概＝o小牛喂食的第一批飼料或初乳富含抗體。區(qū)分血清來(lái)源的另一種方法是檢測(cè)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)水平。GGT是一種存在于血清和不同細(xì)胞類型表面的轉(zhuǎn)移酶，在肝臟中特別活躍(2)。該酶負(fù)責(zé)抗氧化劑谷胱甘肽的代謝。與IgG一樣，GGT也存在于初乳中，在血液中循環(huán)。這導(dǎo)致NBCS的血清GGT水平高于FBS ?？梢允褂毛F醫(yī)篩查來(lái)檢測(cè)IgG和GGT。

  FBS的不同制備方法

  由于FBS是一種復(fù)雜的生物分子混合物，因此某些應(yīng)用可能需要額外的準(zhǔn)備步驟。FBS含有補(bǔ)體蛋白。對(duì)于特定細(xì)胞類型，血清中存在的抗體可以與細(xì)胞結(jié)合，激活補(bǔ)體蛋白并導(dǎo)致細(xì)胞裂解。

  1、熱滅活FBS ——將血清加熱至56°C持續(xù)30分鐘——可滅活補(bǔ)體蛋白。

  2、FBS的另一種制備方法涉及IgG消耗。血清中的IgG可能會(huì)妨礙從雜交瘤培養(yǎng)物中純化單克隆抗體?？梢岳?/span>IgG與ProteinA以高親和力結(jié)合的能力從血清中去除IgG。與ProteinA共價(jià)偶聯(lián)的Sepharose柱可用于處理FBS并降低或消耗IgG水平。

  3、另一種FBS治療方法是活性炭剝離。這種治療方法使用活性炭樹脂來(lái)降低類固醇激素（雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇）的濃度，這些激素是親脂性的（在脂質(zhì)和脂肪中具有良好的溶解性）。對(duì)于受體研究，活性炭/葡聚糖剝離的FBS被證明是有用的，因?yàn)樗档土祟惞檀技に氐臐舛取?/span>

  4、一種FBS物理滅活處理涉及伽馬射線照射。盡管根據(jù)監(jiān)管要求對(duì)FBS進(jìn)行了污染物檢測(cè)，但仍可能存在極低水平的污染物，從而對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成問(wèn)題。使用伽馬射線照射（波長(zhǎng)較短的電磁輻射）處理FBS可減少病毒和支原體的病原體污染。該處理不會(huì)影響血清的質(zhì)量，也不會(huì)影響激素、滲透壓、pH值和電泳圖。使用伽馬射線照射的FBS對(duì)于生產(chǎn)病毒和疫苗尤為重要。

  5、過(guò)濾也可用于處理FBS。使用0.45μm過(guò)濾器過(guò)濾血清可用于去除因纖維蛋白原存在而產(chǎn)生的絮狀物質(zhì)，因?yàn)樾鯛钗镔|(zhì)可能會(huì)妨礙實(shí)驗(yàn)。對(duì)于培養(yǎng)對(duì)內(nèi)毒素（脂多糖，LPS）敏感的細(xì)胞，例如巨噬細(xì)胞和免疫細(xì)胞，可能需要低內(nèi)毒素FBS。在FBS中發(fā)現(xiàn)微量?jī)?nèi)毒素（LPS）。然而，超低內(nèi)毒素FBS在無(wú)菌條件下經(jīng)過(guò)額外過(guò)濾，以保證<0.1EU/ml的內(nèi)毒素水平。此外，超濾可以去除細(xì)胞外囊泡（EV）中的污染物以及蛋白質(zhì)和RNA聚集體，這些都是已知的FBS污染形式。EV污染可能會(huì)帶來(lái)問(wèn)題。EV耗盡的FBS有利于需要標(biāo)準(zhǔn)化的臨床工作流程或EV研究。

  其他來(lái)源的血清

  除牛以外的其他動(dòng)物的血清也已被證明可用于研究。例如，馬血清對(duì)于維持培養(yǎng)的造血祖細(xì)胞并使其保持分化程度較低的狀態(tài)非常重要。其他動(dòng)物的血清也有用，包括山羊、驢、兔子、羔羊和豬。