牛血清知多少？一篇文章帶你全面了解

  牛血清是動物血清一種，是細胞培養(yǎng)不可或缺的天然培養(yǎng)基。牛血清富含細胞生長必須的營養(yǎng)成份，通常含有一定比例的蛋白質(zhì)、糖類、礦物質(zhì)和維生素。牛血清按種類分為胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。

  【胎牛血清】（FoetalBovineSerum，簡稱FBS）：是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。胎牛血清中含有豐富的生長因子、細胞黏附分子和其他細胞培養(yǎng)所需的成分，非常適合各種細胞的培養(yǎng)。

  這里值得注意的是由于其來源于胎兒，胎牛血清具有較高的胚胎抗原含量，因此在一些特定的細胞培養(yǎng)條件下需要小心使用。

  【新生牛血清】（NewbornCalfSerum，簡稱NBCS）：0—7天內(nèi)（也有說法是0—30天內(nèi)）;

  相比于小牛血清，新生牛血清中的生長因子和抗體水平較低。它的優(yōu)勢在于它的穩(wěn)定性和較低的胚胎抗原含量，這使得它在一些特殊細胞類型的培養(yǎng)中更適用。

  【小牛血清】（CalfSerum）：采自出生30天至1年的小牛。它通常含有較高的成長因子和抗體水平，可以促進細胞的增殖和生長。小牛血清中的激素和免疫因子水平相對較低，這使得它在一些特定的細胞培養(yǎng)條件下更具優(yōu)勢。

  牛血清對細胞培養(yǎng)用途

  胎牛血清用途：胎牛血清是細胞培養(yǎng)常用的血清。適合多種細胞類型的培養(yǎng)，廣泛應用常規(guī)細胞培養(yǎng)、細胞傳代和細胞研究領域。胎牛血清采自發(fā)育中的牛胚胎，營養(yǎng)成分較為豐富，且此時的牛胚胎沒有完整的補體系統(tǒng)，因此胎牛血清無需熱滅活，內(nèi)毒素含量低，保證細胞健康！

  新生牛血清用途：新生牛血清的營養(yǎng)成份略高于小牛血清，胚胎抗體水平較低，可用來培養(yǎng)肝細胞和骨髓細胞等細胞。

  小牛血清用途：小牛血清主要是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)，提供激素和各種生長因子、結(jié)合蛋白、促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用！適合哪些對激素、免疫因子要求較低的細胞。

  如何篩選牛血清？

  因胎牛血清使用較為廣泛，這里我們重點介紹一下對胎牛血清的篩選。胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用的補充劑，其質(zhì)量對細胞生長和實驗結(jié)果至關重要。因此，在選擇胎牛血清時，需要進行嚴格的篩選。

  1.pH值：首先，要確保胎牛血清的pH值在7.4至7.6的范圍內(nèi)，這與細胞生長的最佳生理環(huán)境相一致。

  2.有效成分：接下來，需要檢查胎牛血清中細胞因子、生長因子、激素、粘附因子等有效成分的質(zhì)量水平。這些成分對細胞生長、分化和存活起著關鍵作用。同時，還需要關注血清中免疫抑制因子的含量，因為過高的免疫抑制因子可能會抑制細胞的免疫反應。

  3.內(nèi)毒素：內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁的一種成分，它可以誘導細胞凋亡，對細胞培養(yǎng)結(jié)果造成負面影響。因此，選擇內(nèi)毒素含量低的胎牛血清至關重要。

  內(nèi)毒素含量越低，級別越高，以胎牛血清為例：

  血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時，此血清為特級胎牛血清；

  血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤25EU/ml時，此血清為優(yōu)級胎牛血清；

  血清中內(nèi)毒素含量≥25EU/ml時，此血清為標準級胎牛血清；

  不同廠家，不同批次的血清，內(nèi)毒素數(shù)值也可能有較大差異，因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告，自行甄別挑選

  4.細胞存活率：細胞存活率是衡量胎牛血清質(zhì)量的重要指標之一。高品質(zhì)的胎牛血清可以支持細胞的存活和增殖，使細胞在培養(yǎng)皿中生長良好。

  5.其他指標：除了上述指標外，還需要關注胎牛血清的血清蛋白含量、補體活性、病毒污染等指標。

  6.批次間差異：需要注意的是，即使同一品牌的不同批次胎牛血清之間也可能存在差異。因此，在選擇胎牛血清時，建議根據(jù)具體的細胞類型和研究目的選擇合適的批次。

  胎牛血清存儲條件

  胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用的補充劑，其質(zhì)量對細胞生長和實驗結(jié)果至關重要。為了保持血清的活性，需要進行適當?shù)拇鎯褪褂谩?

  1.存儲：

  長期儲存：胎牛血清應在-20°C或更低溫度下凍存。

  短期儲存：如果需要短期儲存，可以將血清置于4°C冷藏，但應在一周內(nèi)用完。如果您的實驗用量較少，建議您選擇分裝的50ml規(guī)格，這可以有效地避免浪費和保證血清的質(zhì)量。

  2.使用：

  解凍：解凍血清時，應采用緩慢解凍的方式，例如置于4°C冰箱過夜，避免快速解凍導致血清成分發(fā)生變化。

  配制：血清和培養(yǎng)基的配制應遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則，因為長時間儲存會導致培養(yǎng)基成分發(fā)生變化，影響細胞培養(yǎng)效果。建議配好的培養(yǎng)液在3-5天內(nèi)用完。

  避免反復凍融：反復凍融會破壞血清中的活性成分，降低血清質(zhì)量，因此應盡量避免。

  避免在4°C或更高溫度儲存過久：長時間在4°C或更高溫度下儲存會加速血清的降解和污染，影響血清品質(zhì)。

  3.其他注意事項：

  在進行血清操作時，應嚴格遵守無菌操作，并定期檢查血清是否有污染跡象。

  胎牛血清融化注意事項及說明

  在水浴過程中，血清瓶的平面要完全浸在水中，并緩慢搖動瓶身，使血清均勻解凍，但搖動中盡量不要產(chǎn)生泡沫。血清從-20℃取出后，應先置于4°C冰箱過夜，第二天再進行水浴解凍。

  解凍后的血清，根據(jù)細胞類型和實驗需求，按推薦體積加入到基礎培養(yǎng)基中，充分混勻，制備成新鮮完全培養(yǎng)基（整個操作需在無菌超凈臺中進行，注意無菌操作）。配制好的完全培養(yǎng)基應在4℃冷藏保存，建議在3-5天內(nèi)用完。

  以下是一些補充說明：

  在進行血清操作時，應佩戴手套，避免污染血清。

  配制培養(yǎng)基時，應先將基礎培養(yǎng)基加熱至室溫，再加入血清，并充分混勻。

  胎牛血清需要熱滅火嗎？

  熱滅活是指將血清加熱至56℃，30分鐘，以滅活血清中的補體。補體是一種在免疫反應中起重要作用的蛋白質(zhì)，它可能對某些細胞類型有毒性或抑制其生長。在胎牛血清中，由于胎齡原因，尚未形成完整的補體系統(tǒng)，因此，胎牛血清不會真正干預免疫試驗。故不需滅活。

  哪些情況對血清內(nèi)毒素應格外留意篩選？

  在以下情況下，對血清內(nèi)毒素應格外留意篩選：

  1.干細胞：干細胞對內(nèi)毒素非常敏感，內(nèi)毒素會導致干細胞死亡或功能異常。選擇內(nèi)毒素含量≤1EU/ml的優(yōu)質(zhì)血清對干細胞培養(yǎng)至關重要。

  2.免疫細胞：過高的內(nèi)毒素會誘導免疫細胞釋放炎癥因子，影響免疫反應，例如抑制小鼠紅細胞集落的形成。因此，選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以減少內(nèi)毒素對免疫細胞的影響。

  3.基因敲除相關的細胞實驗：由于基因敲除實驗需要保持細胞的原始狀態(tài)，任何引導細胞衰老或凋亡的試劑都會影響實驗結(jié)果。因此，在準備血清和其他試劑時，盡可能選擇內(nèi)毒素含量≤1EU/ml的血清，對實驗至關重要。

  4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細胞轉(zhuǎn)染：這些實驗對細胞的健康和活力要求較高，選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以提高實驗成功率。

  5.難養(yǎng)細胞：難養(yǎng)細胞對培養(yǎng)條件要求較高，選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以為細胞提供更好的生長環(huán)境，提高細胞存活率。

  6.長期培養(yǎng)、長期凍存、經(jīng)常復蘇：這些情況下，血清會經(jīng)常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康，應選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清，以避免內(nèi)毒素長期累積對細胞的毒性影響。

  上述對牛血清的介紹，牛血清作為細胞培養(yǎng)的天然培養(yǎng)基，正確的選擇對細胞培養(yǎng)非常關鍵。希望上述內(nèi)容對您有所幫助！如果對牛血清還有疑問，歡迎在線咨詢通蔚顧問。通蔚也為科研提供優(yōu)級和特級胎牛血清用于細胞培養(yǎng)，歡迎前來了解！