降低細(xì)胞培養(yǎng)污染率，就這么簡(jiǎn)單！

  當(dāng)你每天在實(shí)驗(yàn)室辛辛苦苦培養(yǎng)細(xì)胞，眼看著培養(yǎng)皿中細(xì)胞一天天茁壯成長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)即將進(jìn)行的細(xì)胞活性分析。遺憾是一場(chǎng)突如其來的細(xì)菌污染卻讓一切功虧一簣，不得不重新開始實(shí)驗(yàn)。由此可見，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，預(yù)防污染的重要性不容忽視。

  污染起源

  污染通常是由于微生物或支原體的存在造成的。至于細(xì)菌，文獻(xiàn)研究表明污染程度可達(dá)5%。這種污染很難檢測(cè)：視覺特征突然改變，發(fā)育中期出現(xiàn)渾濁或顏色改變。至于支原體，用肉眼檢測(cè)是不可能的。它們是最小的獨(dú)立生物體，但卻是大量污染的根源。

  細(xì)胞培養(yǎng)污染物可以分為化學(xué)污染和微生物污染。化學(xué)污染來源于非生命物質(zhì)，例如培養(yǎng)基成分、水中的雜質(zhì)或儲(chǔ)存過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。這些污染物會(huì)干擾細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和代謝。例如，革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的脂多糖（LPS），又稱為內(nèi)毒素，是一種常見的化學(xué)污染物，即使在細(xì)菌死亡后仍然具有生物活性，能引起細(xì)胞培養(yǎng)物發(fā)熱反應(yīng)。內(nèi)毒素屬于熱原，熱原是能引起發(fā)熱的物質(zhì)，包括LPS以及其他微生物產(chǎn)生的外毒素、病毒、真菌等。

  為了防止細(xì)胞培養(yǎng)污染，需要嚴(yán)格執(zhí)行預(yù)防措施，包括但不限于：對(duì)設(shè)備進(jìn)行徹底清潔和消毒；在生物安全柜等無菌環(huán)境中進(jìn)行操作；使用無菌水和高質(zhì)量的培養(yǎng)基；定期監(jiān)測(cè)培養(yǎng)箱和水浴的溫度和清潔度；操作人員的規(guī)范操作和良好的無菌技術(shù)等等。

  細(xì)胞污染有什么影響

  細(xì)胞污染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)研究產(chǎn)生一系列嚴(yán)重的影響：

  1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真：污染物會(huì)干擾細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和代謝，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真，例如細(xì)菌代謝產(chǎn)物可能影響細(xì)胞活性，支原體污染可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，從而誤導(dǎo)研究結(jié)論。

  2.時(shí)間成本增加：污染不僅會(huì)浪費(fèi)寶貴的實(shí)驗(yàn)時(shí)間，還需要額外的時(shí)間進(jìn)行污染鑒定、清除污染、恢復(fù)實(shí)驗(yàn)，甚至可能需要從頭開始整個(gè)實(shí)驗(yàn)。

  3.經(jīng)濟(jì)損失：污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基、血清、培養(yǎng)瓶、移液器吸頭等試劑和耗材的損失，甚至可能損失珍貴的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或細(xì)胞株，造成經(jīng)濟(jì)損失。此外，清潔、消毒和重復(fù)實(shí)驗(yàn)也會(huì)增加人工成本。

  4.團(tuán)隊(duì)合作和實(shí)驗(yàn)室聲譽(yù)：人為錯(cuò)誤是細(xì)胞污染的重要原因之一，例如操作不規(guī)范、缺乏經(jīng)驗(yàn)或溝通不暢。反復(fù)發(fā)生的污染事件會(huì)影響團(tuán)隊(duì)的士氣，損害實(shí)驗(yàn)室的聲譽(yù)，甚至可能影響研究項(xiàng)目的進(jìn)展。”

  如何防止細(xì)胞培養(yǎng)污染

  至于支原體，有不同的測(cè)試可以在培養(yǎng)中檢測(cè)它們：特定培養(yǎng)測(cè)試、DNA比色測(cè)試或PCR檢測(cè)測(cè)試。

  然而，最好的策略是預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)和消除所有受感染或潛在受感染的物質(zhì)。

  為了降低微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，處理在無菌環(huán)境中進(jìn)行。

  改進(jìn)工藝以降低農(nóng)作物污染風(fēng)險(xiǎn)的方法包括：

  1.減少所準(zhǔn)備的培養(yǎng)基數(shù)量，以避免其因受熱或亮度而發(fā)生降解……

  2.使用合適的產(chǎn)品對(duì)孵化器和其他儀器進(jìn)行消毒

  3.使用質(zhì)量水平與細(xì)胞培養(yǎng)兼容的設(shè)備：不含DNA、不含RNase、不含DNase、不含內(nèi)毒素……–

  4.確保環(huán)境清潔（灰塵、蜘蛛也會(huì)造成污染）

  5.避免存放紙板箱，因?yàn)橹灰幸稽c(diǎn)濕度，霉菌就會(huì)非常喜歡紙板箱

  綜合上述，細(xì)胞培養(yǎng)要有預(yù)防意識(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)要確保處于無菌環(huán)境，設(shè)備及時(shí)進(jìn)行消毒、保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境清潔，避免亂堆放紙板箱等。積極做好細(xì)胞培養(yǎng)預(yù)防工作，可以極大提高細(xì)胞培養(yǎng)工作效率，獲得良好的細(xì)胞培養(yǎng)成果。